115 高普考高考三級 植物病理 植物病害防治學 考古題詳解

115 年・高普考・高考三級・植物病理
試題代碼 植物病害防治學

第 一 題20 分

請解釋下列名詞之意涵及在植病防治之應用:

(一) Augmentative biological control

(二) Sanitary and Phytosanitary Measures

(三) Anaerobic soil disinfestation

(四) Phlebiopsis gigantea

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核心觀念

本題考查植物病害防治的四個層次:天敵或有益微生物的增殖釋放、國際植物檢疫規範、土壤病原抑制技術,以及特定生物防治菌的應用。作答時應說明名詞定義、作用方式及防治上的實例。

解題方法

依序用「定義 → 作用或制度原理 → 防治應用」作答。第二小題屬國際貿易與植物檢疫規範,說明其保護目的及適用措施;第三、四小題則要交代處理步驟、作用機制,以及防治對象。

各名詞解析

(一)Augmentative biological control(增補式生物防治)

指將人工繁殖或大量培養的天敵、有益微生物,引入作物生產系統,以提高其族群或接種量,增強對病原生物的抑制效果。這種方式不是只依賴田間原有的天敵或有益菌,而是透過人工釋放或接種加強防治。

常分為兩種操作方式:

  • 接種式釋放(inoculative release):初期釋放一定量的防治生物,期待其在田間繁殖並持續發揮作用。
  • 大量式釋放(inundative release):短時間大量釋放,讓高接種量立即產生抑制效果,通常較不依賴防治生物在田間繁殖。

在植物病害防治上,可施用 Trichoderma spp.、Bacillus spp. 等有益微生物,抑制土壤或根圈中的植物病原菌。防治成效會受菌株、施用量、施用時機及環境條件影響。

(二)Sanitary and Phytosanitary Measures(SPS;食品安全與動植物衛生檢疫措施)

SPS 是世界貿易組織《食品安全檢驗與動植物防疫檢疫措施協定》(SPS 協定)所規範的措施類別。Sanitary 主要涉及人類及動物衛生;phytosanitary 主要涉及植物及植物產品的健康與檢疫。

就植物病害防治而言,植物檢疫措施的目的,是降低有害生物、病原菌或病原細菌傳入、建立與擴散的風險。措施可包括進口限制、檢查、檢疫處理、產地或生產區要求、證明文件及風險評估等。

SPS 措施須以科學原則和風險評估為基礎,並依相關國際標準辦理,避免措施構成不必要或任意的貿易限制。植物檢疫的國際標準主要由《國際植物保護公約》(IPPC)及其國際植物檢疫措施標準(ISPMs)建立。

以命題當年(民國 115 年)法規與國際規範為準。

(三)Anaerobic soil disinfestation(ASD;厭氧土壤消毒)

ASD 是一種在種植前處理土壤、降低土壤傳播性病原生物的防治方法。基本步驟為:

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第 二 題20 分

某育種家宣稱針對番茄的 eIF4EeIF4E(eukaryotic translation initiation factor 4E)基因進行編輯,培育出能抗多種病毒病害的番茄品種。經查,他所使用的技術為 CRISPR/Cas9。

(一) 請問這個新品種的抗病毒機制為何?(8 分)

(二) 請說明運用該技術進行抗病育種的流程及原理。需說明為何此技術所培育出的作物,未來有機會不被納入嚴格的基改法規管制。(12 分)

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核心觀念

本題考查兩個連結的觀念:一是病毒利用寄主因子完成感染,二是 CRISPR/Cas9 可直接改變寄主基因,破壞病毒所需的寄主因子,形成「隱性抗性」。考生須分清楚:此題不是讓 Cas9 去切病毒基因組,而是編輯番茄本身的易感基因 eIF4E。

eIF4E 是真核生物轉譯起始因子,可辨識 mRNA 的 5′ 帽端,參與蛋白質轉譯起始。部分植物病毒,尤其馬鈴薯 Y 病毒科(Potyviridae)的病毒,會利用病毒基因組連結蛋白 VPg 與寄主 eIF4E 互作,以利病毒 RNA 的轉譯、複製或移動。

(一)新品種的抗病毒機制

eIF4E 在此扮演病毒感染所需的寄主易感因子(susceptibility factor,S gene)。CRISPR/Cas9 在番茄 eIF4E 基因的特定位點造成突變,常見結果是基因功能喪失或蛋白質胺基酸改變。被改變的 eIF4E 無法再與病毒 VPg 正常互作,病毒因而難以有效利用寄主細胞進行感染與增殖。

此抗性屬於寄主因子型的隱性抗性:抗性來自易感因子功能降低或喪失,不是植物新增一種直接攻擊病毒的蛋白質。若病毒依賴其他 eIF4E 同源基因或旁系同源基因,單一基因編輯未必足以阻斷感染;抗性範圍也取決於病毒是否依賴該寄主因子。

(二)抗病育種流程及原理

**解題方法:**依序說明「找出病毒依賴的寄主因子 → 設計並執行定點編輯 → 篩選並驗證抗性 → 評估作物性狀與法規定位」。法規部分則從是否引入外源遺傳物質、最終作物的基因組改變型態,以及各國管理制度的產品判定方式切入。

育種流程與 CRISPR/Cas9 原理

  1. **選定目標基因:**確認目標病毒感染需利用番茄的 eIF4E,並選擇要編輯的同源基因與區域。設計時兼顧抗性效果及植株正常生長所需功能,因為 eIF4E 也參與植物自身 mRNA 的轉譯。
  2. **設計導引 RNA:**依目標 DNA 序列設計單導引 RNA(sgRNA),使其可將 Cas9 引導至基因組中的特定位置。Cas9 還須辨識目標附近的 PAM 序列,才能在該處切割 DNA。
  3. **遞送編輯工具:**將 Cas9 與 sgRNA 遞送至番茄細胞,可透過含有編輯元件的載體轉殖,或直接遞送 Cas9 蛋白與 RNA 等方式。
  4. **產生目標突變:**Cas9 在目標位點造成 DNA 雙股斷裂;細胞多以非同源末端接合(NHEJ)修復。修復時可能產生小型插入或缺失,若造成移碼或重要胺基酸改變,即可破壞 eIF4E 功能。
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第 三 題20 分

火鶴花是臺灣具經濟與出口價值的熱帶花卉,火鶴花種苗於民國 89 年經公告為應實施特定疫病蟲害檢查之植物種類。

(一) 依照「火鶴花種苗實施特定疫病蟲害檢查作業要點」檢查之疫病蟲害是哪三種?請寫出病害名稱及病原菌屬名,並分別說明如何進行實驗室內的檢定?(9 分)

(二) 請問火鶴花母株保存園在設置與栽培管理上應符合哪些規定?(11 分)

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核心觀念

本題考《火鶴花種苗實施特定疫病蟲害檢查作業要點》的兩類內容:一是指定檢查的三種病原及其檢定方法;二是母株保存園的設置與日常管理規定。作答時要把三種檢定方法分清楚:線蟲用漏斗分離法,細菌性葉枯病先增量培養再做病原檢測,疫病用葉片誘釣及選擇性培養基分離。

法規基準:以命題當年(民國 115 年)法規為準。

解題方法

依作業要點第三點列出三種指定對象,再對照第八點的檢定方法;第二小題則直接依第六點(一)整理母株保存園的「設置條件」與「操作管理」,避免混入分株苗培殖場或組織培養場的規定。

(一)指定檢查疫病蟲害、病原菌屬及實驗室檢定

疫病蟲害病原菌(蟲)屬名實驗室檢定方法
特定線蟲,即穿孔線蟲Radopholus 屬以改良式柏門氏漏斗分離法,由栽培介質及根樣品中分離、檢查線蟲。
細菌性葉枯病Xanthomonas 屬樣品先經培養基增量培養,再以**雙向瓊脂免疫擴散法、酵素聯結抗體免疫測定法(ELISA)或聚合酵素連鎖反應法(PCR)**檢定。三種方法擇一使用。
疫病Phytophthora 屬以葉片誘釣法及選擇性培養基分離法檢定。葉片誘釣是利用易受感染的葉片誘出疫病菌,再配合選擇性培養基分離確認。

作答提醒

題目問的是病原「屬名」,寫出 Radopholus、Xanthomonas、Phytophthora 即可;不必把種名或種下分類階層當成作答重點。細菌性葉枯病的三種免疫或分子檢測方式是「或」的關係;疫病則須答出誘釣法與選擇性培養基分離法。

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第 四 題20 分

草莓炭疽病及青蔥捲葉炭疽病近年在臺灣發生普遍。

(一) 請問這兩個病害主要由哪個「種」的炭疽病菌所造成?該種炭疽病菌和其他炭疽病菌有何生理特性上的差異?(4 分)

(二) 如果有種植草莓的農民告訴你,近三年田間不論施用百克敏、待克利、四氯異苯腈,防治效果都不好,試推論可能的原因?(6 分)

(三) 請說明草莓炭疽病的整合性管理策略。(10 分)

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核心觀念

本題考查三項觀念:草莓及青蔥炭疽病的病原辨識、殺菌劑作用機制與抗藥性,以及草莓炭疽病的整合性管理。草莓炭疽病在臺灣並非單一病原種造成;青蔥捲葉型炭疽病也有不同病原,因此作答時應區分「主要病原」與「所有病原」。

(一)病原種類與生理特性

草莓炭疽病在臺灣主要病原為炭疽病菌 Colletotrichum siamense;另有 C. fructicola、C. karstii、C. boninense 及 C. miaoliense 等病原。臺灣青蔥捲葉型炭疽病的重要病原亦包括 C. siamense;青蔥炭疽病研究亦曾報告 C. truncatum。

Colletotrichum siamense 的生理特性重點是較能適應高溫環境:青蔥捲葉型炭疽病在約 2828–32∘C32^\circ\mathrm{C} 的條件下發病較嚴重,低溫時病原可在植株基部潛伏,待環境轉為高溫多濕後發病。這種高溫下仍能生長、低溫可潛伏的特性,有助解釋病害在臺灣夏季高溫多濕時迅速加劇。不同炭疽病菌的溫度適應性並不完全相同,不能把單一菌種的溫度反應套用到所有 Colletotrichum。

(二)三種藥劑防效不佳的可能原因

先按作用機制分類:

  • 百克敏:史托比類(QoI),FRAC 11,單一作用位點。
  • 待克利:三唑類,FRAC 3,抑制固醇生合成。
  • 四氯異苯腈:多作用位點保護性殺菌劑,FRAC M5。

百克敏與待克利作用機制不同,四氯異苯腈則屬多作用位點藥劑。因此,三種藥劑都防效不佳時,不能只用「單一藥劑抗藥性」解釋,應優先檢查以下因素:

  1. **田區病原族群對藥劑感受性降低或出現多重耐藥性。**草莓炭疽病菌田間族群已有對部分藥劑感受性降低的研究紀錄;部分菌株也觀察到 ABC transporter(ATP 結合匣轉運蛋白)表現上升,可能藉由外排藥劑降低細胞內藥劑濃度。此現象可造成跨藥劑的耐受性,但不能僅憑田間防效不佳就判定菌株已對三種藥劑都具有抗藥性。
  2. **病原在植株上潛伏感染,或感染源來自帶菌種苗、母株與病株殘體。**藥劑施用後若未能消除既有的內部感染,病害仍可能持續發展。
  3. **施藥時機、覆蓋或使用方式不適當。**未在病害初期施藥、藥液未覆蓋植株易感部位、降雨沖刷,或使用濃度與間隔不符標示,都會降低防效。
  4. **高溫多濕且病原量大,造成病害壓力超過藥劑防治能力。**若只依賴噴藥而未移除病株及控制帶菌苗,田間仍有大量再感染來源。
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第 五 題20 分

某社區栽植的七里香上發生了文獻上查不到的新病害。植株主要出現全株萎凋的現象,請問你會如何進行田間及實驗室的診斷作業?(20 分)

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核心觀念

題目考查的是新病害的系統性診斷:不能只憑「全株萎凋」便判定病原或病名,而須先確認症狀、發病分布與環境條件,再逐步鑑別生物性病害與非生物性傷害,最後以實驗證據確認病因。

「萎凋」是植株因水分供應或輸導失衡而呈現的症狀,成因可能包括根部受損、維管束感染、土壤水分異常、根域缺氧、藥害、鹽害或其他環境逆境。症狀是植物對病害或逆境的反應;病徵則是病原本身或其構造,例如菌絲、孢子、菌核或細菌溢膿。

新病害的因果確認,以**柯霍氏法則(Koch’s postulates)**為基本架構:病原須與病害穩定相關、能自罹病組織分離培養、接種健康感病植株後重現相同症狀,並能自接種發病植株再分離出相同病原。對病毒、專性寄生菌或難以人工培養的病原,須改用適合的替代證據,例如分子檢測、媒介傳播試驗或指示植物接種。

解題方法

一、田間診斷與資料蒐集

  1. 確認寄主與發病範圍 記錄七里香的植株數量、品種或來源、栽植年齡、發病株比例,以及症狀首次出現與擴展的時間。比較健康株、初期病株與重症株,觀察症狀是否由單株擴大,或沿灌溉線、低窪處、施工區、排水方向等呈現規律分布。

  2. 記錄症狀與病徵 觀察萎凋是否在高溫時加劇、夜間或澆水後恢復,並檢查葉片黃化或落葉、枝條枯死、根頸病斑、莖基部腐爛、根系褐變等情形。以刀切開莖基部或枝條,檢查木質部是否變色;檢視根系有無腐敗、缺根或根皮脫落。尋找菌絲、子實體、菌核、細菌溢膿等病徵,並拍攝整株、局部與根部照片。

  3. 調查環境與栽培管理 詢問近期降雨、灌溉頻率、排水狀況、施肥與施藥紀錄、土壤或根域施工、移植及修剪情形。檢查土壤濕度、積水、板結、排水、根域深度,以及是否有機械傷、日灼、寒害或其他環境壓力。若同一區多種植物同時萎凋,須提高對水分、土壤、藥害或其他共同環境因素的注意。

  4. 建立初步鑑別方向 全株萎凋可能來自維管束病原、根腐病原或根系受損,也可能是乾旱、積水缺氧、鹽分過高、肥害或除草劑飄移等非生物因子。田間分布、根部與莖部檢查,以及栽培紀錄可用來排序鑑別方向,但不可單憑萎凋症狀定名。

二、採樣與送驗

  1. 從不同發病程度的數株植株採取樣本,優先選取仍存活、症狀初中期的植株;同時採健康株作比較。
  2. 樣本應包含病健交界處組織,並盡量保留根、根頸、莖基部及帶葉枝條。根部連同少量根域土壤分開包裝,避免土壤污染地上部組織。
  3. 樣本保持新鮮、避免曝曬、過度潮濕或冷凍;不同植株分袋並清楚標示採樣位置、日期、症狀及管理史。附上田間照片與環境資料。
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