109 專利師高等考試 專利師(選試專業日文及生物技術) 生物技術 考古題詳解

核心觀念

本題考查生物技術領域中**治療性單株抗體（Therapeutic Monoclonal Antibodies）**的抗體工程設計（Antibody Engineering）、重組蛋白質製造系統（Expression Systems）以及分子結構與功能之關聯性（Structure-Function Relationship）：

1. 抗體形式與工程化改造：包括嵌合抗體（Chimeric antibody）與人源化抗體片段（Humanized Fab' fragment）之分子結構設計，以及聚乙二醇化（PEGylation）修飾技術。
2. 重組表現系統選擇：原核系統（大腸桿菌 E. coli）與真核系統（哺乳動物細胞，如 CHO 或 SP2/0）在蛋白質轉譯後修飾（Post-translational modification, PTM，特別是 N-糖基化）需求上的決策。
3. 作用機制與效應功能（Effector Functions）：中和腫瘤壞死因子-$\alpha$（TNF-$\alpha$）阻斷發炎反應，以及 Fc 區域所介導的 ADCC（抗體依賴性細胞毒性作用）、CDC（補體依賴性細胞毒性作用）、FcRn 循環機制與胎盤穿透能力。

解題方法

本題屬於標準的「對比型生物技術申論題」，答題架構應以「製造流程」與「分子及生理差異」雙軸線並進：

1. 製造層面：依序剖析「基因構築 $\rightarrow$ 表現宿主選擇 $\rightarrow$ 發酵與轉譯後修飾 $\rightarrow$ 下游純化與化學偶合」，點出為何前者必須使用哺乳類細胞，而後者可採用大腸桿菌系統。
2. 差異層面：從「分子結構」、「製造系統」、「Fc 效應功能（ADCC/CDC）」、「藥物動力學維持機制」及「胎盤穿透性」五大維度逐一對比，並輔以彙整表格，使閱卷委員能一目了然評分重點。

解題技巧

1. 命名原則判斷抗體屬性：

• Infliximab：字根 -xi- 代表嵌合抗體（Chimeric，小鼠可變區 + 人類恆定區），為完整 IgG1 分子，具備 Fc 區，必然需要糖基化，故使用哺乳動物細胞製造。
• Certolizumab pegol：字根 -zu- 代表人源化（Humanized）；其特殊之處在於它是 Fab' 片段且經 PEGylation（聚乙二醇化）修飾，無 Fc 區且無糖基化需求，故使用大腸桿菌即可高產量表現。

2. 常見答題陷阱：

• 誤以為 Certolizumab 是完整抗體：Certolizumab 僅有 Fab' 片段，缺乏 Fc 恆定區。
• 忽略 PEG 的功能：Fab' 片段分子量小（約 50 kDa），極易被腎臟過濾清除，結合 40 kDa 的 PEG 係為了增大流體力學半徑（hydrodynamic radius），大幅延長體內半衰期。
• 遺漏臨床安全性差異：因 Certolizumab 缺乏 Fc 區，無法與胎盤上的新生兒 Fc 受體（FcRn）結合，因此不會主動穿透胎盤，是懷孕期類風濕性關節炎患者的重要選擇。

【答案】

一、Infliximab 與 Certolizumab 之製造方法

(一) Infliximab 之製造

1. 基因構築： Infliximab 為嵌合型 IgG1 $\kappa$ 單株抗體。利用重組 DNA 技術，將針對人類 TNF-$\alpha$ 之小鼠單株抗體可變區基因（$V_H$ 與 $V_L$，約占全分子 25%），與人類免疫球蛋白 IgG1 重鏈恆定區及 $\kappa$ 輕鏈恆定區基因（$C_H$ 與 $C_L$，約占全分子 75%）進行剪接，構築至重組表現質體中。
2. 宿主細胞表現系統： 使用哺乳動物細胞株（如小鼠骨髓瘤細胞 SP2/0 或中國倉鼠卵巢細胞 CHO）。因完整 IgG1 分子的重鏈 $C_H2$ 區域具有 Asn-297 核心 N-糖基化（N-glycosylation）修飾，必須藉助真核哺乳細胞的內質網與高爾基體完成正確的蛋白質折疊、雙硫鍵組裝與醣鏈修飾。
3. 下游發酵與純化： 在生物反應器中進行大規模懸浮培養，細胞將完整抗體分泌至培養基上清液中。經由離心過濾後，利用蛋白質 A（Protein A）親和層析管柱專一性捕捉 Fc 區域進行純化，後續配合離子交換層析及病毒去活化／過濾步驟，製得純化成品。

(二) Certolizumab pegol 之製造

1. 基因構築： Certolizumab 為人源化 Fab' 片段。僅將小鼠抗 TNF-$\alpha$ 抗體之互補決定區（CDR）嫁接於人類免疫球蛋白框架區（FR），構築成僅含人源化輕鏈及重鏈 Fd'（$V_H + C_{H1}$ 及鉸鏈區）的 Fab' 基因，其鉸鏈區保留單一游離的半胱胺酸（Cysteine）殘基以利後續偶合。
2. 宿主細胞表現系統： 使用**原核生物大腸桿菌（Escherichia coli）**表現系統。

核心觀念

本題旨在測驗考生對於自體細胞免疫療法之生物學機轉、體外細胞製程技術、以及台灣生醫法規架構的整合性理解。核心考核重點涵蓋：

1. 法規背景：以命題當年（民國 109 年）法規為準，衛生福利部於民國 107 年（2018 年）9 月 6 日修正發布《特定醫療技術檢查檢驗醫療儀器施行或使用管理辦法》（簡稱《特管辦法》），開放 6 項自體細胞治療技術。其中針對實體癌開放了「自體免疫細胞治療」（包含自體樹突細胞等），適用於標準治療無效之第一至三期實體癌或第四期實體癌。（註：現行法已於民國 113 年修正通過《再生醫療法》與《再生醫療製劑條例》專法規範，但本題解題仍以命題當年法規為準。）
2. 免疫學原理：樹突細胞（Dendritic Cells, DCs）為體內功能最強之專職抗原呈現細胞（Professional Antigen-Presenting Cells, APCs）。其具備抗原攝取、加工處理，並藉由第一型主要組織相容性複合體（MHC class I）與第二型主要組織相容性複合體（MHC class II）將腫瘤抗原呈現給 T 細胞的能力。特別是透過「交叉呈現」（Cross-presentation）路徑，活化專一性細胞毒性 T 淋巴球（CD8+ Cytotoxic T Lymphocytes, CTLs）以進行靶向腫瘤殺傷。
3. 生技製程技術：自病患體內分離前驅細胞（周邊血單核細胞 PBMC / CD14+ Monocytes）、體外細胞激素分化與成熟誘導（GM-CSF, IL-4, TNF-$\alpha$ 等）、腫瘤抗原致敏（Antigen loading / pulsing），以及最終細胞品質管制與回輸。

解題方法

此類「法規銜接生物技術」之國家考試申論題，若僅回答純生物學機轉或僅抄寫法規條文，均無法獲得滿分。建議採取「四階解題法」架構回答：

1. 第一階（法規與適應症定位）：點出 2018 年《特管辦法》之法源地位，明確指出自體樹突細胞治療於法規中規範之適應症範圍（實體癌階段）。
2. 第二階（細胞生物學與免疫機制）：深入剖析 DC 的生理功能、受體表現（MHC-I/II、共刺激分子 CD80/CD86/CD40）及 T 細胞激活路徑（訊號一、訊號二、訊號三）。
3. 第三階（生技製程與抗原負載策略）：以工程化流程條列說明從「採血分離」、「體外分化成熟」、「抗原致敏（胜肽、裂解物、mRNA 等）」到「品管與回輸」的完整 SOP。
4. 第四階（臨床優勢與技術限制）：對比其他療法（如化療、CAR-T）分析其低毒性、專一性優勢，以及面對腫瘤微環境（TME）免疫抑制的突破瓶頸。

選項分析

本題為「申論題」，非選擇題。閱卷評分點主要依據以下四項關鍵構件進行給分審核：

• 構件一：法規制度與臨床適應症範疇
• 評分標準：須明確指出 2018 年《特管辦法》開放之自體免疫細胞項目，並精確點出「自體樹突細胞（Autologous DC）」用於治療「第一至三期標準治療無效之實體癌」以及「第四期實體癌」。若遺漏適應症之分期條件，將被酌予扣分。
• 構件二：樹突細胞的免疫作用機制
• 評分標準：須清楚論述 APC 功能、抗原處理、MHC-I 交叉呈現給 CD8+ CTL、MHC-II 呈現給 CD4+ Th 細胞，並說明共刺激分子（CD80, CD86）與細胞激素（如 IL-12）對 T 細胞完全活化的必要性。
• 構件三：體外細胞培養、分化及抗原致敏製程
• 評分標準：生技科目的核心在於「技術細節」。必須寫出關鍵細胞激素（GM-CSF + IL-4 誘導未成熟 DC，TNF-$\alpha$ 等促成成熟 DC），並至少列出兩種抗原負載方式（如自體腫瘤組織裂解液 Tumor lysate、特異胜肽 Peptide、腫瘤 RNA/DNA 電穿孔等）。
• 構件四：臨床特色、限制與專利發展
• 評分標準：點出自體細胞無移植物抗宿主疾病（GvHD）之高度安全性，並指出免疫抑制性微環境（Treg, MDSC, PD-L1）是影響療效的主要限制，提出與免疫檢查點抑制劑（ICIs）聯合使用等現行發展方向。

解題技巧

1. 關鍵生技名詞精準度：閱卷老師審閱速度極快，卷面必須出現以下核心術語：特管辦法、抗原呈現細胞（APC）、交叉呈現（Cross-presentation）、MHC-I / MHC-II、共刺激分子（CD80/CD86）、GM-CSF + IL-4、抗原致敏（Pulsing）、細胞毒性 T 淋巴球（CTL）。
2. 流程條列化：將實驗室製備流程分為「抽取 $\to$ 誘導 $\to$ 負載 $\to$ 成熟 $\to$ 品管回輸」，結構清楚可大幅降低閱卷疲勞。
3. 常見失分陷阱：

• 混淆免疫細胞類型：切勿將「樹突細胞（DC，負責傳令/抗原呈現）」與「殺手細胞（NK/CIK/CTL，直接殺手）」的功能混為一談；DC 疫苗本身不直接殺傷癌細胞，而是「教育並活化體內的 T 細胞去殺死癌細胞」。
• 忽略「自體（Autologous）」二字：自體細胞治療的優勢在於不具組織相容性排斥問題，但缺點在於無法「異體現貨供應（Off-the-shelf）」，製備時間長且成本高昂。

【答案】

一、 法規背景與臨床適應症（以命題當年民國 109 年法規為準）

1. 法規依據：衛生福利部於民國 107 年（2018 年）9 月修正《特定醫療技術檢查檢驗醫療儀器施行或使用管理辦法》（《特管辦法》），開放 6 項自體細胞治療技術，使台灣成為亞洲少數將自體免疫細胞治療納入常規醫療技術管理的國家。

核心觀念

本題測驗「動物生物技術」領域中最經典的核心實驗技術——**傳統基因轉殖鼠（Classical Transgenic Mice）**之製備流程與下游生物醫學應用。

1. 定義界定：傳統基因轉殖技術特指受精卵雄原核顯微注射法（Pronuclear Microinjection），區別於利用胚胎幹細胞（ES cells）進行同源重組之基因剔除／嵌入（Gene Knockout/Knockin），亦區別於近年發展之 CRISPR/Cas9 基因編輯技術。
2. 核心原理：外源 DNA 表現匣（Transgene cassette）構築 $\rightarrow$ 供胚鼠超數排卵與受精 $\rightarrow$ 雄原核顯微注射 $\rightarrow$ 假懷孕代母胚胎移植 $\rightarrow$ 子代創始鼠（Founder, $F_0$）基因型鑑定與品系建立。其遺傳學本質為外源基因以非同源重組方式「隨機嵌入（Random Integration）」宿主染色體，多以串聯重複（Tandem concatemers）形式存在，主要達成**外源基因的過度表現（Overexpression）**或異位表現（Ectopic expression）。
3. 應用範疇：活體基因功能解析、人類疾病動物模式建立、生物反應器（Bioreactors / Molecular farming）、啟動子（Promoter）活體活性與組織專一性分析、活體標記與細胞譜系追蹤（Lineage tracing）、新藥標靶篩選與毒理評估。

解題方法

本題為標準的雙核心申論題型（「原理」與「應用」），應採取邏輯推進、分層條列的架構作答：

1. 破題定義：首段先精確界定「傳統」意指受精卵原核顯微注射，並點出其外源基因嵌入的分子生物學特徵（隨機嵌入、過度表現）。
2. 製造原理（按實驗時序層層開展）：

• 階段一：外源基因表現匣之構築與純化（含啟動子、cDNA、Poly(A)、除去載體骨幹）。
• 階段二：單細胞期受精卵（Zygote）之取得（超數排卵誘導與交配）。
• 階段三：雄原核顯微注射（說明為何選擇雄原核）。
• 階段四：胚胎移植至假懷孕代母（利用結紮公鼠誘導假懷孕）。
• 階段五：子代基因型鑑定（PCR / Southern blot）與建系。

3. 應用面向（依功能分類論述）：由基礎研究（基因功能、啟動子調控）跨入臨床醫學（疾病模式、致癌基因驗證）及工業應用（乳腺生物反應器、藥物篩檢）。
4. 補強評析（高分關鍵）：簡要點出傳統技術之限制（隨機插入突變、位置效應、拷貝數不確定），展現對現代基因工程技術演進脈絡之全面掌握。

選項分析

本題為申論題，非選擇題。作答時須防範將「傳統基因轉殖（Transgenic）」與「基因剔除（Knockout）」混為一談的常見失分盲點：

• 傳統基因轉殖鼠（Pronuclear microinjection）：外源 DNA 隨機插入宿主基因體，目的為「加入（Gain-of-function）」新基因，產生過度表現或異位表現。此為本題唯一作答主軸。
• 基因剔除／標靶鼠（Gene knockout / targeting via ES cells）：利用胚胎幹細胞與同源重組技術精確破壞特定內源基因，目的為「失去（Loss-of-function）」。若本題大篇幅撰寫 ES cells、同源臂、正負篩選（Neomycin / Ganciclovir），屬文不對題。
• CRISPR/Cas9 基因編輯：屬現代定點編輯技術，非題目所指之「傳統」範疇，可於文末比較時一筆帶過，不可作為主體。

解題技巧

1. 必背實驗術語：PMSG（或 eCG）、hCG、雄原核（Male pronucleus）、假懷孕（Pseudopregnant）、創始鼠（Founder, $F_0$）、串聯重複（Tandem concatemer）、位置效應（Position effect）。寫出這些專業專有名詞是閱卷委員評定專業度的指標。
2. 關鍵因果扣連：務必說明「為何注入雄原核而非雌原核」（雄原核體積較大、較靠近卵表面、易於顯微操作）。
3. 圖表化思考：在正式試卷上若版面允許，可用簡易流程箭號（Transgene $\rightarrow$ Microinjection $\rightarrow$ Embryo transfer $\rightarrow$ Screening）協助閱卷老師迅速掌握答題重點。

【答案】

一、傳統基因轉殖鼠之製造原理

傳統基因轉殖鼠（Transgenic mice）主要係指利用受精卵原核顯微注射法（Pronuclear Microinjection），將設計好的外源 DNA 表現匣直接注入單細胞期受精卵中，使外源基因隨機嵌入（Random integration）小鼠染色體並表現之技術。其核心製備流程如下：

1. 外源基因表現匣之設計與製備（Transgene Construction & Purification）

• 基因匣結構：包含調控表現的啟動子（Promoter，可為廣泛型啟動子如 CMV、CAG，或組織專一型啟動子）、目標基因全長編碼區（cDNA 或含內含子之基因組 DNA，後者常具較高表現穩定度）、以及 3'端聚腺苷酸化訊號（Polyadenylation signal, Poly(A)，如 SV40 poly(A) 或 bGH poly(A)）。

核心觀念

本題考查**真核細胞可誘導型基因表現系統（Inducible Gene Expression System）**之分子生物學機制與生物技術應用。

1. 原核元件之真核化改造：大腸桿菌（E. coli）Tn10 轉座子之四環黴素抗性操縱組（tet operon）經基因工程改造後，移植至真核細胞中運作。
2. 分子組成：包含逆向四環黴素調控之轉錄活化蛋白（rtTA）、四環黴素反應元件（TRE）與最小啟動子（$P_{\text{min}}$）、小分子誘導劑（Doxycycline, Dox）及目標基因（Gene of Interest, GOI）。
3. 調控特異性：利用配體結合引起蛋白質構形改變之原理，達成基因表現的「開／關」精準控制，具高度組織/細胞無毒性、高誘導倍率與時間/劑量依賴性（Dose- and time-dependent）。

解題方法

本題為標準的生物技術申論題，切入點應分為「系統元件組成」、「調控作用機制」及「生技與醫學應用」三大區塊：

1. 元件鋪陳：先清楚列出系統兩大關鍵質體（調控質體與反應質體）之組成，展示紮實的分子生物學底子。
2. 機制解析：以「未加入誘導劑（OFF）」與「加入誘導劑（ON）」兩階段進行對比說明，凸顯其為「正向誘導（Positive induction）」系統。
3. 延伸應用：由體外細胞實驗（致死/毒性蛋白表現）延伸至體內動物模型（條件式基因調控）與臨床基因治療，層次分明。

選項分析

本題為高等考試申論題，並無選項。為避免作答時與相關調控系統混淆，將 Tet-On 系統與其衍生/對應之 Tet-Off 系統及關鍵元件進行對比辨析：

• Tet-On 與 Tet-Off 之差異：
• Tet-Off 系統：由天然 TetR 與 VP16 融合而成（tTA）。無四環黴素（Tet/Dox）時，tTA 結合於 TRE 啟動轉錄（ON）；加入 Tet/Dox 後，tTA 與藥物結合脫落，轉錄關閉（OFF）。缺點是若要誘發基因表現，需等待體內藥物完全代謝清除，反應較為遲滯。
• Tet-On 系統：由突變型 rTetR 與 VP16 融合而成（rtTA）。無 Dox 時不與 TRE 結合（OFF）；加入 Dox 後構形改變方能結合 TRE 啟動轉錄（ON）。優勢在於添加藥物即可迅速活化基因，反應動力學（kinetics）更為快速精準。
• 誘導劑選用（Doxycycline vs. Tetracycline）：
• 實務上 Tet-On 系統首選為 Doxycycline（Dox） 而非 Tetracycline（Tet），因為 rtTA 對 Dox 的親和力較 Tet 高出近百倍，且 Dox 在哺乳動物組織中的穿透力與穩定性均顯著較優。

解題技巧

1. 記憶口訣：

• Tet-On $\rightarrow$ 加藥才 On（需加 Dox 誘導表現）。
• Tet-Off $\rightarrow$ 加藥就 Off（加藥抑制表現）。

2. 常見失分陷阱：

• 忘記交代 最小啟動子（Minimal Promoter, 如 $P_{\text{minCMV}}$）：若缺少 $P_{\text{min}}$，宿主的轉錄複合物無法被招募；若啟動子太強而非「最小」，則會導致未加藥時出現嚴重的漏失表現（Leaky expression）。
• 誤將 rtTA 寫成天然蛋白：務必標明 rtTA 含有突變型的 TetR（rTetR），並融合了單純皰疹病毒（HSV）的 VP16 活化區域。

【答案】

一、 Tet-on 真核細胞基因轉錄調控表現系統之組成與原理

核心觀念

本題評量考生整合「植物基因轉殖工程（農桿菌轉殖技術）」與「分子生物學基因調控（RNA 干擾機制, RNAi）」於農業生物技術產品之應用能力。核心觀念涵蓋以下四項：

1. 農桿菌轉殖系統（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation）：

• 利用農桿菌的雙元載體系統（Binary vector system）。
• 轉移 DNA（T-DNA）之左右邊界序列（Left/Right Border, LB/RB）界定外源基因整合範圍。
• 輔助質體（Helper plasmid）上毒性基因群（vir genes）編碼之蛋白（如 VirD1/D2、VirE2、VirB 複合體）負責 T-DNA 單股切口、穿膜輸送（Type IV secretion system, T4SS）及靶向整合至宿主植物染色體。

2. 髮夾型 RNA（Hairpin RNA, hpRNA）表現卡匣設計：

• 藉由植物啟動子（如 CaMV 35S 或組織專一性啟動子）驅動含有「正向標靶序列—內含子／間隔序列（Intron/Loop spacer）—反向互補標靶序列」的倒位重複（Inverted repeat）卡匣，使轉錄產物能自體摺疊形成雙股 RNA（double-stranded RNA, dsRNA）。

3. 植物體內 RNAi 途徑與後轉錄基因靜默（PTGS, Post-Transcriptional Gene Silencing）：

• 內切核酸酶 DCL（Dicer-like enzyme）將 dsRNA 切割成 21～24 nt 的小干擾 RNA（siRNA）。
• siRNA 雙股解鏈，導引股（Guide strand）與 Argonaute 蛋白（AGO）及其他輔助因子組裝成 RNA 誘導靜默複合體（RISC, RNA-induced silencing complex）。
• RISC 依據序列互補性專一性辨識、裂解標靶 mRNA 或阻遏其轉譯，抑制特定蛋白質表現。

4. 基改食品（GM Foods）的 RNAi 應用型態：

• 內源基因靜默：抑制植物自身的不良成分或酵素基因（例如：抑制多酚氧化酶基因以防止蔬果褐變；抑制天門冬醯胺合成酶以降低高溫油炸產生丙烯醯胺）。
• 宿主誘導基因靜默（HIGS, Host-Induced Gene Silencing）：使植物表現專一針對農業害蟲關鍵生命基因的 dsRNA，昆蟲攝食後在其腸道及細胞內引發 RNAi，導致害蟲致死或發育受阻，達成標靶抗蟲效果。

解題方法

解答本題需建立明確的「工程流程與作用機制鏈」，依序從「載體設計與建構 $\rightarrow$ 農桿菌媒介轉殖與整合 $\rightarrow$ 植物體內 RNAi 途徑活化 $\rightarrow$ 基改食品性狀呈現」四個維度條理開展：

步驟一：設計並建構雙元表現載體（hpRNA T-DNA Cassette）

1. 選定欲抑制之目標基因序列（如改善食品品質之內源基因，或害蟲維持生存必需之關鍵基因）。
2. 在雙元載體的 T-DNA 區段（LB 與 RB 之間）植入表現卡匣： $\text{Promoter} \longrightarrow \text{Sense Sequence} \longrightarrow \text{Intron/Spacer} \longrightarrow \text{Antisense Sequence} \longrightarrow \text{Terminator}$
3. 採用內含子作為間隔區（Intron-spliced hpRNA, ihpRNA），可顯著提升質體在大腸桿菌與農桿菌中的穩定性，並在植物細胞核切除內含子後大幅提高形成 dsRNA 的效率與靜默表現度。

步驟二：利用農桿菌轉殖法將卡匣導入植物基因體

1. 轉化農桿菌：將建構好的雙元載體轉殖至攜帶失活腫瘤誘導質體（Disarmed Ti plasmid，即切除致瘤性 iaaM、ipt 基因但保留完整 vir 區段）的農桿菌感受態細胞。
2. 共培養與轉移（Co-cultivation）：

• 農桿菌與植物外植體（如癒傷組織、葉圓片）共培養；植物傷口分泌的酚類化合物（如乙醯丁香酮, Acetosyringone）活化農桿菌的 VirA/VirG 雙成分調節系統，誘導 vir 基因大量轉錄。
• VirD1/VirD2 核酸內切酶辨識 LB 與 RB，於下股切出單股切口，VirD2 結合於 5' 端形成單股 T-DNA（ssT-DNA）複合物。
• 經由 VirB/VirD4 構成的第 IV 型分泌系統注入植物細胞；VirE2（單股 DNA 結合蛋白）包被保護 ssT-DNA 免於核酸酶水解，引導其穿過核孔進入植物細胞核。

3. 染色體整合與植株再生：ssT-DNA 藉由植物自身的非同源末端修復（NHEJ）等重組機制隨機整合至植物染色體中，透過抗生素／除草劑篩選標記（如 nptII、bar）篩選抗性細胞，再經組織培養分化再生出完整轉殖植株。

步驟三：轉殖植物體內引導 RNAi 作用途徑

1. 轉錄形成 hpRNA：整合至基因體的外源卡匣在植物細胞核內轉錄，產物之正、反向序列自動互補配對，折疊成具雙股結構的髮夾型 RNA（dsRNA）。
2. DCL 酵素裂解：細胞質/核內的植物專一性核酸內切酶 DCL（主要是 DCL4 與 DCL2）辨識外源 dsRNA，將其切割成長度約 21 至 24 個核苷酸的小雙股干擾片段（siRNA duplex），末端具 2 個懸垂核苷酸（2-nt 3' overhang）。
3. RISC 組裝與活性作用：