109 高普考高考二級 水產利用 高等食品微生物學 考古題詳解

109 年・高普考・高考二級・水產利用
試題代碼 高等食品微生物學

第 一 題20 分

請說明:

(一) 可抑制細菌孢子之萌發與生長的食品防腐劑有哪些?(10 分)

(二) 以肉毒桿菌孢子為例,如何使用欄柵技術(Hurdle technology)確保真空包裝常溫保存食品之衛生安全?(10 分)

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核心觀念

本題評量考生對於「細菌孢子(Bacterial Endospore)之生理特性」、「食品防腐劑作用機轉」及「欄柵技術(Hurdle Technology)」於高風險食品保藏中之整合應用能力,涵蓋以下核心理論與法規標準:

  1. 細菌孢子的休眠與萌發機制:細菌孢子具高耐熱與抗化學藥劑特性,一般食品防腐劑多屬於「抑菌型」而非「殺孢子劑(Sporicide)」,主要作用於抑制萌發觸發(Triggering)、破壞萌發受體(Germination receptors)、抑制外被酵素活性,或阻止萌發後細胞伸長生長(Outgrowth)。
  2. 肉毒桿菌(Clostridium botulinum)之生態生理:肉毒桿菌為產神經毒素的厭氧產芽孢桿菌。分為 Group I(蛋白分解型,嗜溫,孢子極耐熱,D121.1∘C≈0.1∼0.25 minD_{121.1^\circ\text{C}} \approx 0.1 \sim 0.25\text{ min},最低生長 pH=4.6\text{pH} = 4.6、最低 aw=0.935a_w = 0.935)與 Group II(非蛋白分解型,嗜冷,最低生長溫度 3.3∘C3.3^\circ\text{C},孢子耐熱性低,最低生長 pH=5.0\text{pH} = 5.0、最低 aw=0.97a_w = 0.97)。
  3. 欄柵理論(Leistner's Hurdle Technology):藉由多重亞致死(Sublethal)之物理、化學因子組合(如溫度、酸鹼值、水活性、氧化還原電位、防腐劑等),引發微生物之多靶點干擾(Multi-target preservation)、動態平衡瓦解(Disturbance of homeostasis)及代謝疲勞(Metabolic exhaustion),在維持食品感官與營養品質之前提下,達到商業無菌或抑菌之安定性。
  4. 法源與衛生標準依據:以命題當年度(民國 109 年)之《食品添加物使用範圍及限量暨規格標準》及衛生福利部公告之《真空包裝即食食品良好衛生規範》為審題準則。

解題方法

  1. 子題 (一) 切入點:
  • 區分「殺滅」與「抑制」:先確立食品防腐劑主要阻斷「萌發階段(Germination)」與「伸長生長階段(Outgrowth)」。
  • 分類論述代表性防腐劑:涵蓋有機酸類(山梨酸、苯甲酸)、無機鹽類(亞硝酸鹽、亞硫酸鹽)、天然抗菌胜肽(乳酸鏈球菌素 Nisin)及脂肪酸酯類等,說明其對孢子的專一性生化抑制機轉與適用食品範疇。
  1. 子題 (二) 切入點:
  • 風險情境診斷:釐清「真空包裝(絕對厭氧)」+「常溫保存(20∼35∘C20 \sim 35^\circ\text{C},落在 Group I 最適產毒溫度)」是肉毒桿菌產毒的極高危險組合。
  • 欄柵因子矩陣配置:不能依賴「低溫」與「氧氣」,必須透過熱處理(FF 值)、水分活性(awa_w)、酸鹼值(pH\text{pH})、化學抑菌劑(如亞硝酸鹽或 Nisin)建立多重屏障。
  • 連結法定規範:援引法規中針對「常溫保存真空包裝食品」之具體指標(如 pH≤4.6\text{pH} \le 4.6 或 aw≤0.85a_w \le 0.85 等),提出兼顧肉毒桿菌孢子抑制與食品品質的工程化設計方案。

解題技巧與常見陷阱

  1. 混淆殺孢與抑孢機轉:
  • 常見陷阱:寫出「防腐劑可以直接殺死肉毒桿菌孢子」。
  • 破解技巧:休眠孢子具有厚皮質層(Cortex)與多層蛋白質外被(Spore coat),多數法定防腐劑在容許劑量下無殺孢子活性(Non-sporicidal),必須強調防腐劑是「抑制萌發受體」或「殺死剛萌發、尚未具備完整細胞壁的幼齡營養細胞(Outgrowing vegetative cells)」。
  1. 忽略真空包裝的負面效應:
  • 常見陷阱:將「真空包裝」列為抑制肉毒桿菌的欄柵因子。
  • 破解技巧:真空包裝抽除氧氣,導致系統之氧化還原電位(EhEh)顯著下降,反而營造了專性厭氧菌(肉毒桿菌)最喜愛的生長產毒環境。因此在論述中,必須將真空包裝視為「必須被補償的風險因子」,進而強化其他欄柵之強度。
  1. 參數記憶精確度:
  • 肉毒桿菌 Group I 抑制臨界點為申論拿分關鍵:pH≤4.6\text{pH} \le 4.6、水活性 aw≤0.935a_w \le 0.935、食鹽濃度 ≥10%\ge 10\%、商業滅菌 12D12D(F0≥3.0 minF_0 \ge 3.0\text{ min})。

【答案】

(一) 可抑制細菌孢子萌發與生長之食品防腐劑及其機制

在食品加工中,常用且能有效抑制產芽孢細菌(如 Bacillus 屬與 Clostridium 屬)孢子萌發(Germination)與萌發後伸長生長(Outgrowth)的防腐劑如下(以民國 109 年《食品添加物使用範圍及限量暨規格標準》為準):

  1. 亞硝酸鹽類(Nitrites,如亞硝酸鈉 NaNO2\text{NaNO}_2):
  • 作用機制:在肉品與水產加工品中,亞硝酸鹽於微酸性環境下會轉化為未解離型亞硝酸(HNO2\text{HNO}_2)及一氧化氮(NO\text{NO}),並與肉品中的鐵硫蛋白結合形成「Perigo 因子」(黑色絡合物)。此物質能強烈抑制孢子萌發後的伸長階段(Outgrowth),阻斷丙酮酸—鐵氧還原蛋白氧化還原酶系統(Pyruvate:ferredoxin oxidoreductase),阻止 ATP 生成與細胞分裂。
  • 主要對象:專一性抑制肉毒桿菌(Clostridium botulinum)孢子。
  1. 乳酸鏈球菌素(Nisin):
  • 作用機制:屬於多胜肽類抗生素(Lantibiotics,我國於民國 106 年增列納入食品添加物防腐劑類)。Nisin 帶正電荷,能結合孢子外被及發芽細胞膜上的脂質中間體 II(Lipid II),破壞其細胞膜完整性並形成穿膜孔洞(Pore formation),造成離子與質子外洩,使孢子喪失膨脹(Swelling)與萌發後生長之能力。
  • 主要對象:各類革蘭氏陽性菌孢子,如 Bacillus cereus、Clostridium botulinum、Alicyclobacillus。
  1. 山梨酸及其鹽類(Sorbic acid / Potassium sorbate):
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第 二 題20 分

請敘述下列微生物之形態或生理特徵及在該項食品中對於食品品質或食品衛生安全之影響。(每小題 5 分,共 20 分)

(一) 乳酸菌(Lactic acid bacteria)在冷藏真空包裝肉品中。

(二) 肉毒桿菌(Clostridium botulinum)之孢子在蔬菜罐頭中。

(三) 嗜水氣單胞菌(Aeromonas hydrophila)在新鮮的魚肉中。

(四) 諾羅病毒(Norovirus)在冷藏介貝類中。

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核心觀念

本題評量考生對於「食品微生物生態學(Food Microbial Ecology)」、「微生物生理與形態分類特徵」以及「食品腐敗與食媒性病原危害評估」之整合應用能力。涉及的核心理論與法規定義包括:

  1. 微生物形態與生理分類:細菌革蘭氏染色反應(G+\text{G}^+/G−\text{G}^-)、氧氣需求(好氧、兼性厭氧、耐氧厭氧、嚴格厭氧)、生長溫度特性(嗜冷、耐冷、嗜溫)、內生孢子形成能力,以及病毒之絕對細胞內寄生特性。
  2. 食品內在與外在環境因子交互作用:水活性(awa_w)、pH\text{pH} 值、氣體組成(真空阻絕氧氣)、貯藏溫度(冷藏低溫障壁)對微生物生長競爭優勢之篩選。
  3. 食品品質劣變與安全危害:
  • 腐敗機制:產氣膨罐(包)、黏液生成、異味產生(如揮發性鹽基態氮 VBN\text{VBN}、三甲胺 TMA\text{TMA}、有機酸)。
  • 致病機制:神經外毒素阻斷乙醯膽鹼傳導、腸毒素致瀉、雙殼貝類濾食性生物蓄積(Bioaccumulation)與超低感染劑量。
  1. 法規標準:依命題當年(民國 109 年)《食品安全衛生管理法》授權訂定之《食品良好衛生規範準則》(GHP)及罐頭食品殺菌標準(商業滅菌、低酸性罐頭食品定義:pH>4.6\text{pH} > 4.6 且 aw>0.85a_w > 0.85)。

解題方法

本題採「分析式答題架構」,每小題配分 5 分,答題時切分為兩大區塊,比例分配為「形態與生理特徵」(2 分)與「對食品品質或衛生安全之影響」(3 分):

  1. 形態與生理特徵:明確寫出菌體形狀、染色性、產孢與否、氧氣需求型態、低溫適應能力及關鍵生化酵素特性(如過氧化氫酶 Catalase、氧化酶 Oxidase)。
  2. 食品影響分析:緊扣題目指定的「食品基質」與「儲存條件」,並從「食品品質(感官腐敗)」與「食品安全(致病風險)」雙重面向論述。若該微生物具雙重角色(如乳酸菌具保鮮防腐亦具過熟酸化劣變),必須兼論正反兩面以求完整。

解題技巧

  1. 關鍵字精準命中閱卷標準:
  • 乳酸菌:必寫「耐冷菌(Psychrotrophic)」、「微好氧/耐氧厭氧」、「生物防護(Biopreservation)」、「產酸與膨包(Blown-pack)」。
  • 肉毒桿菌:必寫「嚴格厭氧」、「耐熱內生孢子」、「低酸性罐頭(LACF)」、「12D12\text{D} 觀念」、「神經毒素(Botulinum toxin)」。
  • 嗜水氣單胞菌:必寫「G−\text{G}^- 單端鞭毛」、「氧化酶陽性(Oxidase (+)\text{Oxidase } (+))」、「耐冷腐敗菌」、「氣溶素(Aerolysin)與蛋白酶分解」。
  • 諾羅病毒:必寫「無套膜 RNA 病毒」、「在食品中不繁殖(無法體外增殖)」、「濾食性生物濃縮(Bioaccumulation)」、「極低感染劑量」。
  1. 常見陷阱迴避:
  • 誤以為諾羅病毒會在貝肉內「增殖腐敗」:病毒缺乏代謝系統,必須在活體宿主細胞內複製,因此介貝類「外觀新鮮完全無異味」仍可能帶有高濃度病毒。
  • 忽略肉毒桿菌不同型別:非蛋白質分解型(Group II)雖耐熱性較低但能在低溫發育;蛋白質分解型(Group I)孢子極耐熱(D121.1∘C=0.1∼0.21 分鐘D_{121.1^\circ\text{C}} = 0.1 \sim 0.21 \text{ 分鐘}),其分解蛋白會產生臭氣與膨罐,但產毒不一定伴隨劇烈膨罐。

詳解內容

(一) 乳酸菌(Lactic acid bacteria, LAB)在冷藏真空包裝肉品中

  1. 形態與生理特徵:
  • 形態特徵:包含革蘭氏陽性(G+\text{G}^+)之無芽孢桿菌(如 Lactobacillus spp.)或球菌(如 Leuconostoc spp., Carnobacterium spp.)。
  • 生理特徵:為耐氧性厭氧(Aerotolerant anaerobe)或微好氧菌,缺乏過氧化氫酶(Catalase (−)\text{Catalase } (-))與細胞色素系統。具耐冷性(Psychrotrophic),可在 0–4°C 低溫下生長代謝;能利用醣類發酵產生乳酸(同質發酵產純乳酸;異質發酵除乳酸外亦產生醋酸、乙醇與 CO2\text{CO}_2)。
  1. 對食品品質與衛生安全之影響:
  • 對食品安全與保鮮(正向保護作用):真空包裝抽除氧氣並形成高阻隔環境,抑制了肉品表面原本佔優勢的好氧性假單胞菌(Pseudomonas spp.),使耐冷性乳酸菌成為優勢菌群。乳酸菌代謝產生乳酸降低肉品表面 pH\text{pH},並釋放細菌素(Bacteriocins)及過氧化氫(H2O2\text{H}_2\text{O}_2),能競爭抑制單核細胞增多性李斯特菌(Listeria monocytogenes)等病原菌及一般腐敗菌,形成生物防護(Biopreservation)效應,顯著延長冷藏保存期。
  • 對食品品質(負面腐敗劣化):若肉品貯存時間過長,異質發酵型乳酸菌過度代謝會造成品質劣變:
  • 產氣膨包(Blown-pack spoilage):釋放大量 CO2\text{CO}_2 導致真空包裝袋鼓脹破壞外觀。
  • 感官劣變:過量蓄積酸性物質產生酸敗味(Sour odor);部分菌種分泌胞外多醣形成表面黏液(Slime formation);代謝生成之過氧化氫與肌紅蛋白作用可能引發肉品綠化變色(Greening)。

(二) 肉毒桿菌(Clostridium botulinum)之孢子在蔬菜罐頭中

  1. 形態與生理特徵:
  • 形態特徵:革蘭氏陽性(G+\text{G}^+)桿菌,具周生鞭毛能運動,在不良逆境下可形成橢圓形、偏生或次端生之「耐熱性內生孢子(Endospores)」,使菌體膨大呈梭狀。
  • 生理特徵:為絕對厭氧菌(Obligate anaerobe)。其孢子具有極高之耐熱抗性(Group I 蛋白質分解型孢子之熱致死時間值 D121.1∘C=0.1∼0.21 分鐘D_{121.1^\circ\text{C}} = 0.1 \sim 0.21 \text{ 分鐘},z=10∘Cz = 10^\circ\text{C})。能在厭氧條件下萌發、增殖,並產生極強之蛋白質神經外毒素(Botulinum neurotoxin)。
  1. 對食品品質與衛生安全之影響:
  • 對食品衛生安全(致死性毒素中毒危害):多數蔬菜罐頭(如玉米、蘆筍、洋菇)屬於「低酸性罐頭食品」(
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第 三 題20 分

請說明:

(一) 食品中之嗜中溫菌(Mesophiles)與低溫菌(Psychrotrophs)之生長溫度範圍(最低和最高生長溫度)與最適生長溫度?(10 分)

(二) 它們對於以何種溫度下貯存的食品之衛生安全會有所影響?(10 分)

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核心觀念

本題旨在評量考生對「食品微生物生長基本溫度(Cardinal Temperatures)」之界定能力,以及「溫度控制與食品保藏安全」之應用整合能力。核心概念涵蓋:

  1. 微生物生長溫度三要素(三點溫度):最低生長溫度(Minimum growth temperature)、最適生長溫度(Optimum growth temperature)與最高生長溫度(Maximum growth temperature)。
  2. 嗜中溫菌(Mesophiles)與耐冷菌/低溫菌(Psychrotrophs)之生理定義:
  • 嗜中溫菌:生長範圍以人體或環境常溫為主。
  • 低溫菌/耐冷菌(Psychrotrophs):根據國際食品微生物規格委員會(ICMSF)定義,係指「能夠在 7∘C7^\circ\text{C} 或以下生長,但其最適生長溫度在中溫範圍(通常為 20∼30∘C20\sim 30^\circ\text{C})」的微生物,切勿與真嗜冷菌(Psychrophiles,最適生長溫度 ≤15∘C\le 15^\circ\text{C}、最高 ≤20∘C\le 20^\circ\text{C})混淆。
  1. 食品貯存溫度與危害控制:食品於危險溫度帶(7∼60∘C7\sim 60^\circ\text{C})及冷藏保藏(0∼7∘C0\sim 7^\circ\text{C})條件下,中溫型與耐冷型微生物對食品腐敗(Spoilage)與食因性病原菌(Foodborne pathogens)危害之關聯性。

解題方法

本題為標準的二段式申論題,作答策略如下:

  1. 子題 (一) 採「數據分項陳述」搭配「統整對照表」:
  • 清楚寫出兩類菌之最低、最適與最高生長溫度區間(需符合國際食品微生物學權威教材如 Jay's Modern Food Microbiology 之標準定義)。
  • 點出 Psychrotrophs 的核心特徵(能在冷藏溫度增殖,但最適溫度仍在常溫)。
  1. 子題 (二) 採「溫度區間 →\rightarrow 危害機制 →\rightarrow 代表菌種(特重水產與一般食品)」之層次論述:
  • 嗜中溫菌:鎖定「常溫、室溫或保溫不足之危險溫度帶(約 15∼45∘C15\sim 45^\circ\text{C})」,著重於多數食因性病原菌大量增殖、產毒與組織胺中毒。
  • 低溫菌(Psychrotrophs):鎖定「冷藏貯存溫度(0∼7∘C0\sim 7^\circ\text{C})」,區分「腐敗菌水解變質」與「耐冷性病原菌低溫致病/產毒」兩大衛生安全層面。

選項分析

本題為申論題,非選擇題,無選項可供個別剖析。閱卷評分重點在於:

  • 溫度範圍是否標準正確,有無混淆 Psychrotrophs 與 Psychrophiles。
  • 貯存溫度是否具體標明溫度數值(如 0∼7∘C0\sim 7^\circ\text{C}、15∼45∘C15\sim 45^\circ\text{C})。
  • 衛生安全影響是否涵蓋「食品中毒病原菌」與「腐敗變質」,並舉出水產或食品代表性菌株。

解題技巧與常見陷阱

  1. 專有名詞陷阱(名詞混淆):
  • 題目中文譯為「低溫菌」,英文特別註記 Psychrotrophs。在食品微生物學中,Psychrotrophs 嚴格稱作「嗜冷耐受菌」或「耐冷菌」;而 Psychrophiles 稱為「真嗜冷菌(嚴格嗜冷菌)」。若誤答為真嗜冷菌的溫度(最適溫度 ≤15∘C\le 15^\circ\text{C}、最高溫度 ≤20∘C\le 20^\circ\text{C}),將大幅失分。
  1. 臨界指標記法:
  • 冷藏界限:以 7∘C7^\circ\text{C} 為重要分水嶺(FDA 與 ICMSF 界定之冷藏生長臨界值)。
  • 水產特色補充:在考「水產利用」類科時,申論應主動帶入水產代表菌,如中溫的腸炎弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、耐冷的 E 型肉毒桿菌(Clostridium botulinum Type E)與假單胞菌(Pseudomonas spp.),可顯著提升答案深度與鑑別度。

【答案】

(一) 嗜中溫菌與低溫菌(Psychrotrophs)之生長溫度範圍

  1. 嗜中溫菌(Mesophiles):
  • 最低生長溫度(Minimum):約 10∘C∼15∘C10^\circ\text{C}\sim 15^\circ\text{C}(部分耐受性較廣者下限可達 5∼8∘C5\sim 8^\circ\text{C})。
  • 最適生長溫度(Optimum):約 30∘C∼40∘C30^\circ\text{C}\sim 40^\circ\text{C}(大多數人體病原菌之最適溫度約在 37∘C37^\circ\text{C} 左右)。
  • 最高生長溫度(Maximum):約 45∘C∼50∘C45^\circ\text{C}\sim 50^\circ\text{C}。
  1. 低溫菌/耐冷菌(Psychrotrophs):
  • 最低生長溫度(Minimum):≤0∘C∼7∘C\le 0^\circ\text{C}\sim 7^\circ\text{C}(通常在 0∼5∘C0\sim 5^\circ\text{C} 仍可繁殖,部分可在低至
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第 四 題20 分

以下為有關乳酸發酵(Lactic acid fermentation)的問題:

(一) 請說明中華民國國家標準(CNS)中發酵乳內之乳酸菌量檢測之培養基、操作步驟與計數原則。(10 分)

(二) 請說明在牛乳與德國酸菜(Sauerkraut)中乳酸菌發酵的主要碳源為何?(4 分)

(三) 請說明在乳酸發酵乳如酸酪乳(Yogurt)中,為何一般常並用同型發酵乳酸菌株和異型發酵乳酸菌株(Homo- and hetero-lactics)?(6 分)

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核心觀念

本題測驗高等食品微生物學在「乳酸發酵工業」與「水產/畜產食品檢驗法規」的核心整合能力,涉及以下法規與微生物生理機制:

  1. 檢驗法規與國家標準:以命題當年(民國 109 年)法規為準,依據《中華民國國家標準》(CNS 3058「發酵乳」及 CNS 14026「食品微生物檢驗法-乳酸菌之檢驗」),考生須掌握乳酸菌計數之標準培養基選擇、檢樣均質稀釋、雙層傾注覆蓋操作法,以及菌落計數與形態鑑別通則。
  2. 碳源代謝生物化學:動物性乳汁與植物性蔬菜組織的基質成分差異。牛乳以雙醣(乳糖)為主;植物組織(甘藍菜)則以滲出之單醣(葡萄糖、果糖)為主要發酵基質。
  3. 發酵型態與風味質地協同作用:專性同型發酵(Homo-fermentative,EMP 途徑)與異型發酵(Hetero-fermentative,磷酸酮醇酶途徑)之產物差異,以及二者在發酵乳凝乳結構形成(Casein isoelectric precipitation)、酸感平衡、揮發性香氣成分(雙乙醯、乙醛、乙酸)生成與胞外多醣(EPS)生成上的功能互補性。

解題方法

  1. 第 (一) 小題(法規檢驗實務):
  • 培養基:區分總乳酸菌檢驗常用的 MRS 瓊脂(de Man, Rogosa and Sharpe agar),以及針對嗜熱菌或鏈球菌的專用培養基(如 M17 agar),並說明培養基 pH 調控與碳酸鈣/指示劑的角色。
  • 操作步驟:按「檢樣均質 →\to 十倍序列稀釋 →\to 傾注平板(Pour plate method) →\to 雙層瓊脂覆蓋(Overlay) →\to 倒置厭氧/微好氧培養」之標準檢驗流程敘述。
  • 計數原則:寫出適當菌落範圍(15~300 CFU 或 30~300 CFU)、菌落特徵、稀釋倍數換算公式,以及革蘭氏染色陽性、觸媒(Catalase)試驗陰性之確認試驗。
  1. 第 (二) 小題(代謝碳源比對):
  • 分別指出牛乳與甘藍菜(酸菜)組織細胞內的碳水化合物形式,明確標註化學名稱(乳糖 vs. 葡萄糖、果糖、蔗糖),並扼要說明其進入菌體的代謝起點。
  1. 第 (三) 小題(菌種共生與發酵生理):
  • 從「生物化學代謝產物」切入,對比同型發酵(只產乳酸)與異型發酵(產乳酸、乙醇/乙酸、CO2CO_2)之本質。
  • 從「產品物化品質」切入,說明同型菌負責快速降酸達到酪蛋白等電點(pI≈4.6pI \approx 4.6)形成凝乳凝膠,異型菌負責揮發性芳香物質(雙乙醯、乙酸)與清爽微氣泡感,兩者並用方能兼顧「凝乳質構」與「濃郁風味」。

選項分析

本題為申論試題,無選擇題選項。各子題評析重點在於法規條文與微生物生化機制的精確度,作答時不可僅寫名詞,應將原理與實務步驟有系統地展開。


解題技巧

  1. 計數題型「覆蓋法」是評分亮點:乳酸菌屬於耐氧或微好氧菌,CNS 標準檢驗操作中強調「凝固後再覆蓋一層薄層培養基(Overlay)」,此步驟能隔絕空氣中大量氧氣並防止菌落蔓延擴散,答題時務必寫出。
  2. 碳源切忌籠統寫「糖類」:牛乳必須明確寫出「乳糖(Lactose)」;德國酸菜萬不可只寫纖維素(乳酸菌無法利用纖維素),必須寫出植物細胞加鹽脫水後滲出的「單醣(葡萄糖、果糖)」。
  3. 菌種並用採「功能對比法」作答:以「同型負責質構與抑菌(快速產酸降 pH 使蛋白質凝固)」搭配「異型負責風味與口感(產氣、雙乙醯、乙酸、多元香氣)」,層次分明即可獲取滿分。

【答案】

(一) 中華民國國家標準(CNS)發酵乳內乳酸菌量檢測

(以命題當年民國 109 年 CNS 3058「發酵乳」及 CNS 14026「食品微生物檢驗法-乳酸菌之檢驗」為準)

  1. 培養基:
  • MRS 瓊脂培養基(de Man, Rogosa and Sharpe Agar):檢測乳酸桿菌屬(Lactobacillus spp.)及總乳酸菌數最普遍使用之標準培養基。
  • M17 瓊脂培養基(M17 Agar):添加甘油磷酸鈉與乳糖,專用於酸酪乳中嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)及乳酸球菌屬(Lactococcus spp.)之培養與計數。
  • 視檢驗需求亦可採用含碳酸鈣(CaCO3\text{CaCO}_3)之平板,藉由乳酸溶解碳酸鈣形成之「透明環(溶鈣環)」辨識乳酸菌落。
  1. 操作步驟:
  • 檢樣製備與稀釋:以無菌操作秤取發酵乳檢樣 25 g25\text{ g}(或 mL\text{mL}),置於無菌均質袋中,加入 225 mL225\text{ mL} 滅菌稀釋液(磷酸鹽緩衝液或 0.1%0.1\% 蛋白腖食鹽水),以均質機充分均質 1∼21 \sim 2 分鐘,製成 10−110^{-1} 檢樣勻液;隨後進行連續十倍序列稀釋。
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第 五 題20 分

請敘述下列各項名詞在食品微生物學中之意義。(每小題 5 分,共 20 分)

(一) 乙醇發酵(Ethanol fermentation)。

(二) 中濕性食品(Intermediate moisture food, IMF)。

(三) 嗜熱菌(Thermophiles)。

(四) 抗菌活性(Antimicrobial activity)。

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核心觀念

本題評量考生對食品微生物學中「代謝生理」、「水活性與食品保藏」、「環境生態分群」及「微生物生長抑制控制」四大基礎領域之核心定義、作用機制及其在加工貯藏上之重要性:

  1. 乙醇發酵(Ethanol fermentation):屬於厭氧能量代謝途徑。醣類經糖解作用(Embden-Meyerhof-Parnas, EMP pathway)生成丙酮酸,再經脫羧與還原生成乙醇及二氧化碳,探討微生物能量平衡(NAD+\text{NAD}^+ 之再生)與食品發酵之應用。
  2. 中濕性食品(Intermediate moisture food, IMF):基於水分活性(Water activity, awa_w)與溶質滲透壓理論,探討水分介於新鮮食品與脫水食品之間,能在室溫下抑制多數腐敗與致病微生物,達到商業貨架壽命之保藏技術。
  3. 嗜熱菌(Thermophiles):微生物依最適生長溫度分類之生態群。探討高溫環境下微生物細胞膜脂質飽和度、蛋白質高階結構之熱穩定性,及其在食品熱加工(尤其是低酸性罐頭食品平酸腐敗)中之指標意義。
  4. 抗菌活性(Antimicrobial activity):化學或生物性物質抑制微生物生長(抑菌,bacteriostatic)或直接致死(殺菌,bactericidal)之效能評估,涵蓋作用機制、最低抑菌濃度(MIC)與食品保鮮應用。

解題方法

高考二級名詞解釋題每小題配分 5 分,切忌僅以單句簡答。標準的解題架構應遵循「四段式黃金得分框架」切入:

  1. 精準定義:點出該名詞在食品微生物學上的本質定位與關鍵門檻條件。
  2. 生化機制/關鍵參數:寫出核心生化途徑(如化學反應式)、關鍵物理化學數值(如 awa_w 數值區間、生長溫度區間)。
  3. 指標微生物:列舉代表性發酵菌、腐敗菌或受控微生物學名。
  4. 食品及水產加工應用與重要性:鏈結實務加工場景(如釀造、水產調味乾製品、罐頭加工平酸腐敗、天然生物保鮮劑),突顯水產利用類科之專業深度。

子題深度分析

(一) 乙醇發酵(Ethanol fermentation)

  • 生化途徑與反應式: 葡萄糖經 EMP 途徑代謝為兩分子丙酮酸(Pyruvate),在無氧條件下,酵母菌藉由丙酮酸脫羧酶(Pyruvate decarboxylase)將丙酮酸脫羧轉化為乙醛(Acetaldehyde)並釋出 CO2\text{CO}_2;接著由醇去氫酶(Alcohol dehydrogenase, ADH)催化,以 NADH+H+\text{NADH} + \text{H}^+ 將乙醛還原為乙醇(Ethanol),同時再生氧化態之 NAD+\text{NAD}^+,使糖解作用得以持續循環產能。 總反應方程式為: C6H12O6+2ADP+2Pi→2C2H5OH+2CO2+2ATP\text{C}_6\text{H}_{12}\text{O}_6 + 2\text{ADP} + 2\text{P}_i \rightarrow 2\text{C}_2\text{H}_5\text{OH} + 2\text{CO}_2 + 2\text{ATP}
  • 代表菌種:以酵母菌 Saccharomyces cerevisiae 為最主要代表;細菌中如運動發酵單胞菌(Zymomonas mobilis,採用 Entner-Doudoroff, ED 途徑)亦可進行乙醇發酵。
  • 食品與微生物學意義:
  1. 產製酒精飲料(啤酒、葡萄酒、清酒等)及發酵麵食之膨脹(利用其產生的 CO2\text{CO}_2)。
  2. 產物乙醇可降低水活性並破壞細胞膜通透性,對雜菌具抑制作用,延長保存期限。

(二) 中濕性食品(Intermediate moisture food, IMF)

  • 物理化學定義與特性: 指含水量約在 15%∼40%15\% \sim 40\%、水分活性控制在 aw=0.60∼0.85a_w = 0.60 \sim 0.85 範圍內,經調配後不需高度冷藏或低溫凍結,即可在常溫下直接食用並具有一定貨架穩定性(Shelf-stable)之食品。
  • 微生物抑制原理: 主要透過添加保濕劑(Humectants,如甘油、山梨醇、食鹽、蔗糖)提高滲透壓以降低自由水含量。此 awa_w 範圍低於絕大多數食品病原細菌(如肉毒桿菌 Clostridium botulinum 生長極限為 aw≈0.935a_w \approx 0.935)的生長低限。
  • 食品微生物控制盲點: 在 aw=0.85a_w = 0.85 邊界仍有金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,需氧生長極限可達 aw=0.83∼0.85a_w = 0.83 \sim 0.85)產生腸毒素之風險,且耐滲透壓酵母菌(Osmophilic yeasts)與耐旱黴菌(Xerophilic molds,生長極限約 aw=0.60∼0.65a_w = 0.60 \sim 0.65)仍可能生長,故常配合「柵欄技術」(Hurdle technology,如調整 pH、添加山梨酸鉀防腐劑或真空包裝)以確保衛生安全。
  • 水產利用實例:水產調味半乾製品(如調味魷魚絲、半乾魚片、燻製水產品)。

(三) 嗜熱菌(Thermophiles)

  • 溫度生理學分類: 指最適生長溫度介於 50∘C∼65∘C50^\circ\text{C} \sim 65^\circ\text{C},生長溫度範圍約在 45∘C∼80∘C45^\circ\text{C} \sim 80^\circ\text{C} 之間的微生物族群(高於 80∘C80^\circ\text{C} 者通常定義為極端嗜熱菌 Hyperthermophiles)。
  • 抗熱生理機制: 細胞膜中含有高度飽和脂肪酸(含支鏈或異構烷烴鏈),使細胞膜在高溫下維持液晶結構而不瓦解;細胞內酵素與結構蛋白具有高密度的離子鍵、雙硫鍵及疏水性核心,熱變性溫度顯著提高。
  • 食品微生物學危害與指標:
  1. 罐頭熱加工之抗性指標:許多嗜熱性芽孢桿菌(如嗜熱脂肪地芽孢桿菌 Geobacillus stearothermophilus)其耐熱芽孢之 D121∘CD_{121^\circ\text{C}} 值極高,常被作為蒸氣滅菌製程確效(Bioindicator)的指標菌。
  2. 高溫腐敗型態:在低酸性罐頭食品中若殺菌不足或殺菌後冷卻不良(貯存在 40∘C40^\circ\text{C} 以上),會引起「平酸腐敗」(Flat-sour spoilage,產酸不產氣,外觀不膨罐但內容物酸化變質)或熱嗜熱厭氧性腐敗(如 Thermoanaerobacter thermosaccharolyticum 產酸產氣膨罐)。
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