112 身心障礙特考四等 衛生技術 醫用微生物學概要 考古題詳解

核心觀念

本題考的是無菌製程（aseptic processing）​與終端滅菌（terminal sterilization）​的差別。細胞治療製劑含有具活性的細胞，通常無法承受高溫、輻射或化學滅菌等會破壞細胞活性的處理。因此，製造上的核心做法是：先將可滅菌的設備、容器與原物料滅菌，再於受控的無菌環境中操作細胞，避免製程中引入微生物。

無菌操作可降低污染風險，但不能只靠最終無菌檢驗來「製造出」無菌產品；無菌品質須由整體製程設計、環境控制、人員操作及製程確效共同建立。

解題方法

作答時先判斷產品本身是否能接受終端滅菌。細胞治療產品須保有細胞活性，因此應以無菌製程控制為主，再依材料或步驟是否能承受滅菌，選擇適當方法。

製造過程可採取下列措施：

1. 滅菌可耐受的設備與包材 培養器具、管路、接頭、容器及包材，依其材質與用途採用適當且經確效的滅菌方式，例如高壓蒸氣滅菌、乾熱滅菌或輻射滅菌。使用一次性無菌耗材時，應確認其滅菌與包裝完整性。

2. 對可過濾液體進行除菌過濾 培養基、緩衝液或部分添加液若與過濾方式相容，可使用除菌級濾膜處理，常見孔徑為 $0.22\,\mu\text{m}$。過濾器須適用於該溶液，並確認過濾步驟的完整性與操作條件。細胞懸液本身不能以此方式過濾除菌，因細胞會被濾膜截留或受損。

3. 在受控潔淨環境中進行無菌操作 於符合產品風險與製程需求的潔淨室或局部單向氣流環境內，進行細胞接種、培養、收集、分裝與封裝。控制懸浮微粒及微生物污染，並依規範執行環境監測。

核心觀念

本題考查無需培養的診斷檢驗（culture-independent diagnostic tests, CIDTs）：不必先讓病原菌在人工培養基上生長，即可直接從檢體中偵測病原體本身、其核酸或其相關抗原。這類方法適用於難以培養、培養耗時，或培養敏感度不足的病原微生物。

作答時列出三種方法，並說明各自偵測的標的與基本原理即可。

解題方法

可依「偵測標的」整理 CIDTs：核酸、抗原、病原體特徵訊號。以下列出三種常見方法：

1. 核酸擴增檢測：直接偵測病原體的特定 DNA 或 RNA 序列。
2. 抗原檢測：直接偵測檢體中的病原體蛋白或其他抗原。
3. 核酸探針雜交：以互補核酸探針辨識病原體特有的核酸序列。

三種方法與原理

一、核酸擴增檢測（NAAT；如 PCR、RT-PCR）

從檢體萃取核酸，以病原體特異性引子辨識目標序列，並透過聚合酶連鎖反應（PCR）反覆複製該序列，使其達到可偵測的量。若病原體為 RNA 病毒，可先以反轉錄酶將 RNA 轉成互補 DNA，再進行擴增，即 RT-PCR。此法直接偵測病原體核酸，不需病原體存活或增殖。

核心觀念

本題考查環境黴菌的培養、分離與種級鑑定。培養可使環境樣本中的黴菌形成菌落，並挑取單一菌落純化；但培養出黴菌不等於證明它會致病，也不代表它是特定感染的病因。種級鑑定須結合菌落與顯微形態，必要時以分子方法確認。

解題方法

（一）培養基

使用沙保弱氏葡萄糖瓊脂（Sabouraud dextrose agar, SDA）。此培養基常用於黴菌及酵母菌培養，偏低的 pH 有助真菌生長並抑制部分細菌。

環境樣本可能伴有細菌，因此可選用添加抗生素的 SDA，例如 chloramphenicol，以抑制細菌污染。若需篩選特定黴菌，可依目標選擇其他專用培養基；但一般黴菌分離以 SDA 為基本答案。

（二）培養環境

將培養基於有氧、室溫至約 25–30°C培養。黴菌生長速度差異很大，應觀察數日至數週；皮癬菌或其他生長較慢的黴菌，所需時間可能更長。

若懷疑雙相性真菌，須考慮在不同溫度下培養以觀察其形態轉換：環境溫度下可呈黴菌型，接近人體溫度時則呈酵母型或其他組織型態。一般環境黴菌分離題，核心作答仍為有氧、約 25–30°C 培養。

（三）分離與種級鑑定

培養後依菌落形態挑取菌落，反覆轉種至新培養基，直到取得純培養。觀察菌落的顏色、表面質地、生長速度及反面顏色，並製作顯微鏡標本，觀察菌絲、分生孢子梗與孢子排列等特徵，進行初步鑑定。

要準確鑑定至種（species），可採以下方法：

核心觀念

中華肝吸蟲是食源性肝吸蟲，成蟲寄生於人類及其他哺乳類的肝內膽管。生活史須經過淡水螺類第一中間宿主及淡水魚第二中間宿主；人吃下魚肉中的囊蚴後感染。掌握兩個關鍵階段即可作答：

• 感染期：淡水魚肌肉或皮下組織中的囊蚴（metacercaria）。
• 診斷期：糞便中的含胚卵（embryonated egg）。

解題方法：依「蟲卵排出—螺—魚—人—膽管成蟲」排列生活史

成蟲寄生在膽管，蟲卵隨膽汁進入腸道，再由糞便排出；蟲卵進入淡水後被螺攝入，幼蟲在螺體內發育，離螺後再進入淡水魚，形成囊蚴。人食入含囊蚴的魚後，囊蚴在十二指腸脫囊，幼蟲沿膽道移行至肝內膽管發育為成蟲。

生活週期（5 分）

1. 成蟲寄生於膽管：人或其他終宿主膽管內的成蟲產卵。
2. 蟲卵隨糞便排出：含胚卵經膽汁進入腸道，隨糞便排入淡水。
3. 第一中間宿主為淡水螺：螺攝入蟲卵後，幼蟲在螺體內依序發育為胞狀幼蟲（sporocyst）、雷蚴（redia）及尾蚴（cercaria）。
4. 第二中間宿主為淡水魚：尾蚴離開螺體，侵入淡水魚的肌肉或皮下組織，形成囊蚴。
5. 人食入囊蚴而感染：囊蚴在十二指腸脫囊，幼蟲經膽道移行至肝內膽管，成熟為成蟲並產卵，完成生活史。

主要人類感染途徑（5 分）

人類主要因生食或未充分煮熟含囊蚴的淡水魚而感染。魚肉若以生醃、短時間醃漬、煙燻或其他未能殺死囊蚴的方式處理，仍有感染風險。感染的關鍵是吞入魚肉中的囊蚴；